Mikoplazmos aptikimo rinkinys (PGR)

Užteršimas mikoplazmomis turės neigiamą poveikį visiems ląstelių aspektams ir tapo labai vertinama ląstelių kultūros problema. Todėl labai būtina reguliariai nustatyti mikoplazmos užterštumą. Šiame mikoplazmos aptikimo rinkinyje naudojamas PGR metodas, skirtas specifiškai aptikti mikoplazmos užterštumą įvairiose auginamų ląstelių biologinėse medžiagose (pvz., ląstelių kultūrose, eksperimentinių gyvūnų išskyrose, gyvūnų serume ir kt.). Rinkinyje naudojami mišrūs pradmenys yra specifiniai pradmenys, sukurti konservuotai Mycoplasma 16S rRNR sekos sričiai. Specifinį Mycoplasma DNR PGR amplifikaciją galima užbaigti per vieną valandą, naudojant atitinkamą Mycoplasma PCR mišinį (2×), naudojant ląstelių kultūros tirpalą kaip PGR šabloną. Šis rinkinys pasižymi dideliu jautrumu ir gali aptikti vos 20 mikoplazmos kopijų.

Laivas su šlapiu ledu; Saugoma -20 laipsnių temperatūroje, galioja 12 mėnesių.

1. Paruoškite mėginį: Į švarų PGR mėgintuvėlį buvo paimtas tinkamas kiekis ląstelių kultūros supernatanto, kurį reikia ištirti. Šie PGR vamzdeliai buvo termiškai apdoroti 95 laipsnių temperatūroje 5 minutes PGR prietaise ir naudojami kaip šablonas. Serumo mėginiai gali būti atskiesti mikoplazmos neturinčiu vandeniu, o atitinkami mėginiai buvo patalpinti į švarų PGR mėgintuvėlį. Šie PGR vamzdeliai buvo termiškai apdoroti 95 laipsnių temperatūroje 5 minutes PGR prietaise ir naudojami kaip šablonas. ;

2. Paruoškite PGR reakcijas: nustatykite neigiamą kontrolę (1 μL mėginio pakeiskite tokiu pat kiekiu vandens be mikoplazmos) ir teigiamą kontrolę (pridėkite 0,5 μL teigiamos kontrolės prie 1 μL mėginio kaip šabloną). kiekvienas eksperimentas. Eksperimento metu dėvėkite vienkartines kaukes ir pirštines ir būkite atsargūs, kad išvengtumėte netinkamo egzogeninės mikoplazmos užteršimo;

3. PGR programos nustatymas:

4. Gelio elektroforezė: paimkite 10 μL PGR produkto ir naudokite 1% agarozės gelį elektroforezės aptikimui.

5. Išanalizuokite rezultatus: kiekviename eksperimente patikrinkite mėginių užterštumą mikoplazma, palygindami su neigiamos ir teigiamos kontrolės rezultatais. Teigiamos juostos dydis buvo apie 500 bp. Jei neigiamų kontrolinių testų rezultatuose yra juostų, tikėtina, kad tai yra PGR sistemos užterštumas, todėl siūloma dar kartą patvirtinti rezultatus. Jei reikia, PGR produktai taip pat gali būti reguliariai sekvenuojami, siekiant nustatyti konkrečias mikoplazmų rūšis.

1. Šis rinkinys gali aptikti M. orale,M. argininis, M. Bovis, M. fermentans, M. gallisepticum, M. hominis, M. pirum, Ureaplasma spp, M. hyorhinis, M. pneumoniae, A. laidlawii ir kitas mažiausiai 11 mikoplazmos užteršimo rūšių.

2. Prieš naudojimą visi reagentai turi būti atšildyti ir kruopščiai sumaišyti ant ledo, o panaudojus laikyti -20 laipsnių temperatūroje.

3. Kiekvienam eksperimentui turi būti nustatytos neigiamos ir teigiamos kontrolės, o eksperimentinė grupė rekomenduoja nustatyti mėginio šablono gradientus.

4. Operacijos metu būtina dėvėti kaukes ir griežtai laikytis PGR veikimo standartų, kad išorinė tarša nepakenktų eksperimento rezultatams.

5. Siekiant užtikrinti ląstelių eksperimentų patikimumą ir stabilumą, rekomenduojama reguliariai nustatyti užterštumą mikoplazmomis.

6. Dėl savo saugumo ir sveikatos dėvėkite laboratorinį chalatą ir vienkartines pirštines.

Tik moksliniams tyrimams!

Populiarus Žymos: mikoplazmos aptikimo rinkinys (pcr), Kinijos mikoplazmos aptikimo rinkinys (pcr) gamintojai, tiekėjai, gamykla