MagBind bakterijų genominės DNR ekstrahavimo rinkinys

 

Produkto pavadinimas	Kat. Nr.	Spec.
MagBind bakterijų genominės DNR ekstrahavimo rinkinys	G3603-50T	50 T

 

 

MagBind bakterijų genominės DNR ekstrahavimo rinkinys gali greitai išlaisvinti bakterijų genominę DNR per specialiai optimizuotą bakterijų lizės buferio sistemą. Kartu su superparamagnetinėmis magnetinėmis granulėmis, kurias mūsų įmonė sukūrė specialiai nukleino rūgščių ekstrakcijai, lizate esanti genominė DNR yra selektyviai adsorbuojama veikiant rišamajam tirpalui, o nedidelis magnetinių granulių adsorbuotų priemaišų kiekis pašalinamas per išvalomas skalavimo tirpalas, o veikiant eliuavimo tirpalui išsiskiria adsorbuota genomo DNR. Šis rinkinys tinka įvairioms gramneigiamoms bakterijoms ir daugumai gramteigiamų bakterijų. Gauta didelio grynumo ir didelio vientisumo genominė DNR gali būti tiesiogiai naudojama tolesnei PGR amplifikacijai, Southern hibridizacijai, bibliotekos paruošimui ir kitiems molekulinės biologijos eksperimentams.

 

 

Lizocimas, proteinazė K ir RNazė A turi būti gabenamos su šlapiu ledu ir laikomos -20 laipsnio temperatūroje; Kiti reagentai siunčiami ir laikomi kambario temperatūroje iki 12 mėnesių.

 

 

Komponento numeris	Komponentas	G3603-50T
G3603-1	Lizocimas	1 ml
G3603-2	Lizocimo buferis	7 ml
G3603-3	Buferis MB1	12 ml
G3603-4	Buferis MB2	12 ml
G3603-5	Proteinazė K	1 ml
G3603-6	RNazė A	500 ul
G3603-7	SweMag karoliukai	1 ml
G3603-8	Buferis MBP	12 ml (prieš naudojimą įpilama 18 ml bevandenio etanolio)
G3603-9	Buferis PW	24 ml (prieš naudojimą pridedama 56 ml bevandenio etanolio)
G3603-10	Buferis TE	10 ml
vadovas		Viena kopija

 

 

1. Jei yra buferio MB1 nuosėdų, ištirpinkite jį kaitindami iki 65 laipsnių ir naudokite, kai sušils iki kambario temperatūros.

2. Prieš naudojimą įpilkite 18 mL bevandenio etanolio į buferį MBP ir 56 mL bevandenio etanolio į buferį PW.

3. Reikalingi magnetiniai stovai, tačiau jie neįeina į šį rinkinį.

 

 

1. Centrifuguokite 1-5 mL per naktį šviežios bakterijų kultūros 12,000 aps./min. greičiu 1 minutę ir išmeskite supernatantą.

Pastaba: gramteigiamų bakterijų atveju, surinkus organizmus, reikia įpilti lizocimo tirpalo, kad sulaužytų ląstelės sienelę. Specifinis metodas yra toks: įpilama 130 µL lizocimo buferio, 20 µL lizocimo, sumaišoma ir kratoma, kol bakterijos visiškai suspensijos, vandens vonioje 37 laipsnių temperatūroje 60 min., maišant kas 10 min.

2. Į centrifugos mėgintuvėlį įpilkite 200 μL buferio MB1 ir sumaišykite maišydami.

3. Į centrifugos mėgintuvėlį įpilkite 20 μL proteinazės K ir 10 μL RNazės A, gerai išmaišykite pipete arba sūkuriu, tada inkubuokite 56 laipsnių temperatūroje 20 min., kol tirpalas atrodo skaidrus (jei tirpalas neskaidrus šiuo metu pailginkite inkubacijos laiką iki 30 minučių ir maišykite kartą per 10 minučių).

4. Į centrifugos mėgintuvėlį įpilkite 200 uL buferio MB2 ir 200 μL absoliutaus etanolio ir sumaišykite jį aukštyn kojomis, tada gali atsirasti flokuliuojančių nuosėdų.

5. Į centrifugos mėgintuvėlį įpilkite 20 μL SweMag Beads suspensijos (prieš naudojant SweMag granules reikia visiškai resuspenduoti ir tolygiai paskirstyti), pūskite pipete, kol magnetinės granulės pasiskirstys tolygiai.

6. Magnetiniams rutuliukams buvo leista pastovėti kambario temperatūroje 10 min., o proceso metu magnetiniai rutuliukai kelis kartus buvo pučiami ir maišomi pipete, kad magnetiniai rutuliukai išliktų suspensijoje.

7. Padėkite vamzdelį ant magnetinio stovo ir palaikykite 30 sekundžių. Kai supernatantas yra skaidrus, išsiurbkite ir išmeskite supernatantą.

8. Įpilkite 500 μL buferio MBP, nuimkite magnetinį stovą, švelniai pipete braukite aukštyn ir žemyn, kol magnetinės granulės gerai išsisklaidys. Padėkite vamzdelį ant magnetinio stovo 30 sekundžių. Kai supernatantas yra skaidrus, išsiurbkite ir išmeskite skaidrų supernatantą.

9. Įpilkite 600 μL buferinio PW, nuimkite magnetinį stovą, švelniai pipete aukštyn ir žemyn, kol magnetinės granulės gerai išsisklaidys. Padėkite vamzdelį ant magnetinio stovo 30 sekundžių. Kai supernatantas yra skaidrus, išsiurbkite ir išmeskite skaidrų supernatantą.

10. Pakartokite 9 veiksmą.

11. Atidarykite centrifugos mėgintuvėlio dangtį, palikite kambario temperatūroje 5-10 minutes, kad visiškai išgaruotų likęs etanolis. (Neleiskite jiems išdžiūti, kad nepakenktų nukleorūgščių išeigai)

12. Nuimkite magnetinį stovą, įpilkite 50–100 μL buferio TE arba vandens be nukleazės ir švelniai pipete aukštyn ir žemyn, kad magnetinės granulės vėl suspenduotų, 5 minutes palaikykite kambario temperatūroje.

13. Padėkite mėgintuvėlį ant magnetinio stovo, kol magnetinės granulės bus visiškai adsorbuotos, tada išsiurbkite supernatantą į naują centrifugos mėgintuvėlį be nukleazės, kad gautumėte labai gryną genominę DNR.

 

 

1. Prieš naudodami būtinai atidžiai perskaitykite šį gaminio vadovą.

2. Siekiant užtikrinti ekstrahavimo būdu gautos genominės DNR išeigą ir vientisumą, turėtų būti naudojama kuo daugiau šviežių organizmų.

3. Pradinis ekstrahuoto bakteriofago kiekis niekada neturėtų būti per didelis ir turi būti pakankamai lizuotas, kitaip gali būti paveikta genominės DNR išeiga ir grynumas.

4. Magnetinių granulių suspensijas reikia laikyti, kad neužšaltų.

5. Magnetinius rutuliukus lengva nusėsti, todėl prieš naudojimą juos reikia gerai sukratyti, kad būtų vienodos suspensijos.

6. Prieš dedant magnetines granules, kitus reagentus reikia gerai išmaišyti.

7. Nedžiovinkite magnetinių granulių ilgą laiką, nes tai gali turėti įtakos DNR eliuavimo efektyvumui.

 

Tik tyrimams!

 

 

Populiarus Žymos: magbind bakterijų genominės DNR ekstrahavimo rinkinys, Kinija magbind bakterijų genominio DNR ekstrahavimo rinkinio gamintojai, tiekėjai, gamykla