SweMagrose Protein A antikūnais išgryninti magnetiniai karoliukai

Baltymas A yra Staphylococcus aureus randamas ląstelės sienelės paviršiaus baltymas, kurio molekulinė masė yra 42 kDa. Baltymai A ir baltymai G yra funkciškai panašūs ir gali specifiškai prisijungti prie žinduolių imunoglobulino (Ig). Rekombinantiniai baltymai A ir G su atitinkamomis modifikacijomis, sujungtais su magnetinėmis granulėmis, gali būti naudojami imunoprecipitacijai arba antikūnų gryninimui. Protein A magnetiniai rutuliukai tinka žmogaus IgG1, IgG2, IgG4, pelės IgG2a, IgG2b imunoprecipitacijai, o Protein G magnetiniai karoliukai – žmogaus IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG2b, IgG2b, IgG2, IgG2, IgG1, IgG2, IgG2. , žiurkė IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c polikloniniai antikūnai. (Konkrečią informaciją rasite I lentelėje)

Šiame produkte panaudotos pačių sukurtos ir pagamintos baltymu A baltymu pažymėtos magnetinės granulės, palyginti su panašiais rinkoje esančiais produktais, šis produktas efektyviau suriša antikūnus ir turi mažesnį nespecifinio surišimo greitį, kartu su optimizuotu buferiu patogus ir efektyvus imunoprecipitacijos eksperimentams; jis gali būti plačiai naudojamas izoliuojant ir išgryninant tikslinius baltymus tokiuose mėginiuose kaip ląstelių lizatai, ląstelių sekrecijos supernatantai, serumas, ascitas ir kt.

Laivas su šlapiu ledu; Laikyti 2-8 laipsnių temperatūroje, galioja 12 mėnesių.

Su antikūnų gryninimu susijusių reagentų formulės nurodomos toliau, vartotojas gali būti koreguojamas pagal konkrečias eksperimentines sąlygas.

Rankinė procedūra (pavyzdžiui, pelių ascito IgG valymas)

1. Mėginio apdorojimas: paimkite 500 μL ascito mėginio, įpilkite jungiamojo plovimo buferio, kad susidarytų 500 μL, jei mėginyje yra daugiau baltymų nuosėdų, centrifuguokite supernatantą eksperimentams, kurie gali pagerinti antikūno grynumą.

2. Išankstinis magnetinių granulių apdorojimas: 30 s sumaišykite antikūnu išgrynintas magnetines granules, kad pakankamai resuspenduotų, paimkite 100 μL 50 % (v/v) SweMagrose Protein A antikūnais išgrynintų magnetinių granulių į kitą naują 1,5 ml EP mėgintuvėlį ir išmeskite magnetiniu būdu. supernatantą, nuplaukite jį 1 ml rišamojo plovimo buferį du kartus, o po to magnetiniu būdu paimkite supernatantą.

Pastaba: granulių kiekį galima reguliuoti pagal antikūnų kiekį mėginyje.

3. Antikūnų adsorbcija: 1 veiksme apdorotą mėginį pridėkite prie magnetinių granulių 2 veiksme, sumaišykite ir gerai išmaišykite, įdėkite EP mėgintuvėlį į sukamąjį maišytuvą arba rankiniu būdu švelniai pasukite mėgintuvėlį kambario temperatūroje (apie 25 laipsnių), kad Magnetiniai rutuliukai visiškai susiliečia su mėginiu, apverskite jį 15 min., padėkite ant magnetinio separatoriaus stovo 30 s, o tada išmeskite supernatantas.

4. Magnetinio rutuliuko plovimas: į EP mėgintuvėlį įpilkite 1 mL rišančio plovimo buferio, vėl suspenduokite purtant ir magnetiškai sugerkite 30 s. Išmeskite supernatantą ir pakartokite veiksmą 3 kartus.

5. Antikūnų eliuavimas: į EP mėgintuvėlius įpilkite 0,5–1.0 mL eliuento su magnetinėmis granulėmis, išplautomis, kaip aprašyta aukščiau, ir greitai sususpenduokite mėgintuvėlius pipete arba maišydami, o tada švelniai. Kambario temperatūroje (apie 25 laipsnių) apverskite mėgintuvėlius maišytuve arba rankomis, apvertę 10 min atskirkite mėgintuvėlius magnetiniu siurbimu, ir tada surinkite supernatantą į naujus EP mėgintuvėlius.

6. Antikūnų neutralizavimas: 5 veiksme į antikūnų eliuatą įpilkite tam tikrą neutralizavimo tirpalo kiekį, paprastai 1/10 antikūnų eliuato tūrio (pvz., jei antikūno eliuatas yra 500 μL, pridedamas neutralizavimo tirpalo kiekis yra 50 μL) , kad išplautų antikūnų pH vertė būtų palaikoma neutralioje aplinkoje, kuri yra palanki antikūno biologiniam aktyvumui palaikyti ir išvengti antikūnų. inaktyvavimas.

7. Magnetinių rutuliukų apdorojimas: po naudojimo granules du kartus nuplaukite eliuavimo tirpalu, atskirkite magnetiniu būdu ir išmeskite supernatantą; tada tris kartus nuplaukite surišančiu plovimo tirpalu, atskirkite magnetiniu būdu ir išmeskite supernatantą; resuspenduokite granules 200 µL konservavimo tirpalo ir laikykite 2–8 laipsnių temperatūroje.

1. Prieš pradėdami valyti antikūnus, atidžiai perskaitykite šias instrukcijas.

2. Neužšaldykite ir necentrifuguokite granulių, nes tai gali sukelti negrįžtamą granulių susikaupimą.

3. Rankiniam valdymui reikia naudoti magnetinio atskyrimo rėmą.

1 lentelė

Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar gydomosioms procedūroms!

Populiarus Žymos: swemagrose protein antikūnų išgryninti magnetiniai karoliukai, Kinijos swemagrose protein antikūnai išgryninti magnetiniai karoliukai gamintojai, tiekėjai, gamykla